Anti-GFP免疫磁珠將高質量的(de)(de)鼠源單克(ke)隆Anti-GFP抗體共(gong)價偶聯在超(chao)順磁(ci)(ci)性(xing)納米微球(qiu)表(biao)面,可(ke)特異性(xing)地與(yu)動植物(wu)(wu)或(huo)(huo)微生物(wu)(wu)裂解(jie)液、血(xue)清、腹水等(deng)(deng)中(zhong)含有(you) GFP 標(biao)(biao)簽(qian)(qian)的(de)(de)蛋(dan)(dan)白結合(he)，從而用于(yu)帶有(you) GFP 標(biao)(biao)簽(qian)(qian)的(de)(de)融(rong)合(he)蛋(dan)(dan)白或(huo)(huo)其蛋(dan)(dan)白復合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)免疫沉(chen)淀(dian)(Immunoprecipitation, IP)、免疫共(gong)沉(chen)淀(dian)(Co-IP)或(huo)(huo)純化(hua)。Anti-GFP Magnetic Beads (Anti-GFP 磁(ci)(ci)珠)，可(ke)以特異性(xing)地結合(he) GFP 標(biao)(biao)簽(qian)(qian)融(rong)合(he)蛋(dan)(dan)白，并可(ke)以借助磁(ci)(ci)力架等(deng)(deng)磁(ci)(ci)分離設備非常便捷地應用于(yu)帶有(you) GFP 標(biao)(biao)簽(qian)(qian)的(de)(de)融(rong)合(he)蛋(dan)(dan)白或(huo)(huo)其蛋(dan)(dan)白復合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)免疫沉(chen)淀(dian)或(huo)(huo)純化(hua)等(deng)(deng)實驗。

產品優勢

1.具有高效的蛋(dan)白結合(he)能力。

2.超低非特異性(xing)吸附(fu)的性(xing)能(neng)。

3.配合磁力架操作省時(shi)、簡便、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常溫運輸(shu)。4℃保(bao)存，有效(xiao)期(qi) 24 個(ge)月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基，用 PBS 洗細胞兩次。

2.收集細胞(bao)至 1.5 mL EP 管(guan)內，按比例加(jia)(jia)入 IP Lysis/Wash Buffer，同時(shi)加(jia)(jia)入 PMSF 等相應的抑制(zhi)劑(ji)，混(hun)勻(yun)后置于(yu)冰上(shang)靜(jing)置 5-20 min（期間混(hun)勻(yun)幾次(ci)）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集(ji)上清(qing)液，置(zhi)于冰上以備(bei)后續(xu)實驗(yan)（或置(zhi)于-80 ℃長期(qi)保存(cun)）。

表 1.培養皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使(shi)用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清(qing)。

2.用(yong) PBS 洗細胞(bao)一次，即用(yong) PBS 將細胞(bao)團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞(bao)，棄上清。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸(xuan)細胞。每 50mg 細胞使(shi)用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同(tong)時加入 PMSF 等相應(ying)的抑(yi)制(zhi)劑，混(hun)勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混(hun)勻幾(ji)次(ci)）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心(xin)收集上清液，置于冰上以備(bei)后續(xu)實驗（或(huo)置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般(ban)建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀(xi)釋血清樣(yang)品至目標(biao)蛋(dan)白終(zhong)濃度(du)為 50~150 µg/mL，置(zhi)于冰上備(bei)用（或置(zhi)于-20 ℃長期保存）。

免疫沉淀

【注】：為保證(zheng)磁珠均勻分布，使(shi)用前通過(guo)反復顛倒或(huo)輕微渦旋混勻瓶中(zhong)磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-GFP Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心(xin)管中。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕(qing)柔混勻。

3.將離心(xin)(xin)管放入磁(ci)力(li)架中收(shou)集磁(ci)珠到離心(xin)(xin)管的一邊(bian)。去除上清(qing)。

4.向離心(xin)管(guan)中加(jia)入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心(xin)管(guan)數次(ci)或輕微(wei)渦旋混(hun)勻 1min。用磁(ci)(ci)力(li)架(jia)收集磁(ci)(ci)珠(zhu)。去除(chu)上清。

5.將制備好(hao)含(han)有 GST 標記(ji)蛋(dan)白(bai)加入裝有磁珠的離心管中，保持混勻室(shi)溫下孵育(yu) 1-2 h。

6.用(yong)磁力架收集(ji)磁珠，除去未結(jie)合的樣品，保(bao)存以備(bei)分析。

7.向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔(rou)混勻。收集磁珠，棄(qi)上(shang)清。再重復洗兩次。

8.變(bian)性洗脫：向離心(xin)管(guan)中加(jia)入(ru) 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置(zhi)于 100℃水浴或(huo)者金屬浴中加(jia)熱(re) 10 min。通過磁力架分(fen)離磁珠，保留(liu)含有目的抗(kang)原的上(shang)清。

【注】：如需保(bao)持蛋(dan)白活性，也可采用以下洗脫方式。

低(di) pH 洗脫：向離(li)心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫(wen)下孵育(yu)離(li)心管 5-10 min。通過磁力分離(li)磁珠(zhu)，保留(liu)含有目的抗原(yuan)的上清。每 100 µL 洗出液中加入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低(di) pH。

注意事項

1.本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等(deng)領域。

2.請勿高速離心、干燥或(huo)冷凍磁珠，這些操作會導致磁珠聚(ju)集而降(jiang)低(di)結合(he)能(neng)力。

3.IP 實驗(yan)(yan)中不同類型的(de)(de)(de)抗(kang)體(ti)與(yu)抗(kang)原結合的(de)(de)(de)親和性是有(you)區別的(de)(de)(de)，抗(kang)體(ti)與(yu)抗(kang)原結合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的(de)(de)(de)影響，因此，如使(shi)用(yong)本實驗(yan)(yan)步(bu)驟不能獲得最佳的(de)(de)(de)實驗(yan)(yan)結果，可(ke)自行(xing)優化(hua)操作細節或者(zhe)篩選及配制緩(huan)沖液進行(xing)實驗(yan)(yan)，推(tui)(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)李(li)記生物的(de)(de)(de)相關產品(pin)，參照相關產品(pin)推(tui)(tui)薦(jian)。

4.微(wei)球使(shi)用前應充(chong)分振蕩均勻。微(wei)球應保存(cun)在儲存(cun)溶液中，防止干(gan)燥(zao)。

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