Anti-His免疫磁珠將高質量的(de)鼠源單克隆Anti-His抗體共價偶聯在超順(shun)磁性納米微(wei)球表面,可特異性地(di)與(yu)動(dong)植物或微(wei)生物裂解(jie)液、血清、腹水等中含(han)有(you) HIS 標簽(qian)(qian)的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)結合，從而(er)用于(yu)帶有(you) His 標簽(qian)(qian)的(de)融(rong)合蛋(dan)白(bai)(bai)或其(qi)蛋(dan)白(bai)(bai)復合物的(de)免(mian)疫沉(chen)淀(Immunoprecipitation, IP)、免(mian)疫共沉(chen)淀(Co-IP)或純化。Anti-His Magnetic Beads (Anti-HIS 磁珠)，可以特異性地(di)結合 HIS 標簽(qian)(qian)融(rong)合蛋(dan)白(bai)(bai)，并可以借助磁力(li)架等磁分離設(she)備非常便捷地(di)應用于(yu)帶有(you) HIS 標簽(qian)(qian)的(de)融(rong)合蛋(dan)白(bai)(bai)或其(qi)蛋(dan)白(bai)(bai)復合物的(de)免(mian)疫沉(chen)淀或純化等實驗。

產品優勢

1.具有高(gao)效(xiao)的蛋(dan)白結合能力(li)。

2.超低非特(te)異性吸附的性能。

3.配合磁力(li)架(jia)操作省時、簡便、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常(chang)溫運輸。4℃保存，有效期 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基，用 PBS 洗細胞(bao)兩次。

2.收(shou)集細胞至 1.5 mL EP 管內，按比例加(jia)(jia)入(ru) IP Lysis/Wash Buffer，同時(shi)加(jia)(jia)入(ru) PMSF 等相(xiang)應的抑(yi)制劑(ji)，混勻(yun)后置于冰上靜置 5-20 min（期(qi)間混勻(yun)幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離(li)心(xin)收集上清(qing)液，置于冰上以備后續(xu)實驗（或置于-80 ℃長(chang)期保存）。

表 1.培養(yang)皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用(yong)體(ti)積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清(qing)。

2.用 PBS 洗細(xi)胞一次，即用 PBS 將細(xi)胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細(xi)胞，棄上清。

3.用(yong)預冷的(de) IP Lysis/Wash Buffer 重懸細(xi)(xi)胞。每 50mg 細(xi)(xi)胞使用(yong) 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時(shi)加入 PMSF 等相應的(de)抑制劑，混(hun)勻后置(zhi)于冰上(shang)靜置(zhi) 5-20 min（期間混(hun)勻幾次(ci)）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上清(qing)液，置(zhi)于(yu)冰上以(yi)備后續實(shi)驗（或(huo)置(zhi)于(yu)-80 ℃長期(qi)保(bao)存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目標(biao)蛋白終濃度為 50~150 µg/mL，置(zhi)于冰上備用（或置(zhi)于-20 ℃長期(qi)保存）。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均(jun)勻(yun)分布，使用(yong)前通(tong)過反(fan)復顛倒或輕微渦旋混勻(yun)瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的(de) Anti-His Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心(xin)管中。

2.向磁(ci)珠(zhu)中加(jia)入(ru) 500 µL 預(yu)冷 PBS，輕柔(rou)混勻(yun)。

3.將離(li)心(xin)(xin)管放入磁力架中收集磁珠到(dao)離(li)心(xin)(xin)管的一邊。去(qu)除上清(qing)。

4.向離(li)心管中加(jia)入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛(dian)倒離(li)心管數次或輕微渦旋混勻(yun) 1min。用磁力架收集磁珠。去除上(shang)清。

5.將制備(bei)好(hao)含有 GST 標(biao)記蛋(dan)白加入裝(zhuang)有磁珠的離心(xin)管(guan)中，保(bao)持混(hun)勻室溫下孵育(yu) 1-2 h。

6.用磁力架收集磁珠，除去未結(jie)合的樣品，保(bao)存以備(bei)分析。

7.向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收集磁珠，棄上清(qing)。再重復洗兩次。

8.變性洗脫(tuo)：向離心管中(zhong)加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置(zhi)于 100℃水浴(yu)或者金屬(shu)浴(yu)中(zhong)加熱(re) 10 min。通過磁力(li)架分(fen)離磁珠，保留含有目的(de)抗原(yuan)的(de)上清。

【注】：如需保持蛋白活性(xing)，也可采用以下洗脫(tuo)方(fang)式(shi)。

低(di)(di) pH 洗脫：向離(li)心管中(zhong)加入(ru) 100 µL Elution Buffer。保(bao)(bao)持混勻在室溫下(xia)孵育離(li)心管 5-10 min。通過磁力(li)分(fen)離(li)磁珠，保(bao)(bao)留含有目的(de)抗原的(de)上清。每 100 µL 洗出液中(zhong)加入(ru) 10 µL Neutralization Buffer 來中(zhong)和(he)低(di)(di) pH。

注意事項

1.本產品僅限于(yu)科學(xue)實驗研究使用(yong)，不得用(yong)于(yu)臨床診(zhen)斷、治療(liao)等領域。

2.請(qing)勿高速(su)離心、干燥或冷凍磁珠(zhu)，這(zhe)些操作會導致磁珠(zhu)聚(ju)集(ji)而降低結合能(neng)力。

3.IP 實(shi)驗中不同類型的(de)(de)抗(kang)體與抗(kang)原結合的(de)(de)親(qin)和性是有區別的(de)(de)，抗(kang)體與抗(kang)原結合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的(de)(de)影響，因此，如使用本實(shi)驗步驟不能獲得最佳的(de)(de)實(shi)驗結果，可自行優化操作(zuo)細節(jie)或者篩選及配(pei)制(zhi)緩(huan)沖液進行實(shi)驗，推薦使用李(li)記生物的(de)(de)相關產品，參照相關產品推薦。

4.微(wei)球(qiu)使用前應(ying)充(chong)分(fen)振蕩均勻。微(wei)球(qiu)應(ying)保存(cun)在儲存(cun)溶液中，防止干燥(zao)。

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