Anti-GST免疫磁珠將高(gao)質量(liang)的(de)(de)(de)鼠(shu)源(yuan)單克隆 Anti-GST 抗體共(gong)價偶聯(lian)在超順磁性(xing)納米微(wei)球(qiu)表面,可特異性(xing)地與動植物(wu)或微(wei)生物(wu)裂解(jie)液(ye)、血清(qing)、腹水(shui)等中含有 HIS 標簽的(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)結(jie)合(he)，從(cong)而用于(yu)帶(dai)有 His 標簽的(de)(de)(de)融合(he)蛋白(bai)(bai)或其蛋白(bai)(bai)復合(he)物(wu)的(de)(de)(de)免(mian)疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免(mian)疫共(gong)沉淀(Co-IP)或純化(hua)。

Anti-GST Magnetic Beads (Anti-GST 磁(ci)珠(zhu))，可(ke)以特異性地結合(he) GST 標簽(qian)融合(he)蛋白，并可(ke)以借(jie)助磁(ci)力架等磁(ci)分離設(she)備非常便捷地應用于帶(dai)有 GST 標簽(qian)的融合(he)蛋白或其蛋白復合(he)物的免疫沉淀或純化等實驗。

產品優勢

1.具有高(gao)效的蛋白結合(he)能力。

2.超低非特(te)異(yi)性吸附(fu)的性能。

3.配合磁力架操(cao)作省時、簡便、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常(chang)溫(wen)運輸(shu)。4℃保存(cun)，有效期 24 個月(yue)。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培(pei)養(yang)基，用(yong) PBS 洗細胞兩(liang)次。

2.收集(ji)細胞至 1.5 mL EP 管(guan)內，按比例(li)加入(ru) IP Lysis/Wash Buffer，同(tong)時(shi)加入(ru) PMSF 等相應的抑(yi)制劑，混勻后置于冰上(shang)靜(jing)置 5-20 min（期(qi)間(jian)混勻幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集(ji)上清液，置于冰(bing)上以備后(hou)續實(shi)驗（或(huo)置于-80 ℃長期保存）。

表 1.培養(yang)皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用(yong)體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細(xi)胞，棄上清。

2.用 PBS 洗細胞(bao)(bao)一(yi)次(ci)，即(ji)用 PBS 將細胞(bao)(bao)團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收(shou)集細胞(bao)(bao)，棄上清。

3.用預(yu)冷的(de)(de) IP Lysis/Wash Buffer 重懸細(xi)胞。每 50mg 細(xi)胞使(shi)用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同(tong)時加入 PMSF 等相應(ying)的(de)(de)抑制(zhi)劑，混勻后置于冰上靜(jing)置 5-20 min（期間混勻幾(ji)次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上(shang)清(qing)液(ye)，置于(yu)冰上(shang)以備后續實驗（或置于(yu)-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀(xi)釋血清(qing)樣品至(zhi)目標蛋白終濃度為 50~150 µg/mL，置(zhi)于冰(bing)上備(bei)用（或(huo)置(zhi)于-20 ℃長期保存）。

免疫沉淀

【注】：為(wei)保(bao)證磁珠(zhu)均勻分布，使用前通過反復顛倒或輕微(wei)渦(wo)旋混勻瓶中(zhong)磁珠(zhu)。

1.將(jiang) 25µL(0.25 mg)的(de) Anti-GST Magnetic Beads 加入(ru) 1.5 mL 離心(xin)管中。

2.向(xiang)磁珠中加入 500 µL 預(yu)冷 PBS，輕柔混勻。

3.將離心(xin)管(guan)放入(ru)磁(ci)力架中收集(ji)磁(ci)珠到(dao)離心(xin)管(guan)的一邊。去除上清。

4.向離心(xin)管中加入(ru) 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛(dian)倒離心(xin)管數(shu)次或輕(qing)微(wei)渦旋混(hun)勻 1min。用(yong)磁力(li)架收集磁珠。去除上清。

5.將制備(bei)好含有 GST 標記蛋白加入(ru)裝有磁(ci)珠的離心管(guan)中，保持混勻室(shi)溫(wen)下孵育 1-2 h。

6.用(yong)磁力架收(shou)集磁珠，除(chu)去未結合的樣品(pin)，保存以備(bei)分析。

7.向離心管(guan)中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕(qing)柔(rou)混勻。收集(ji)磁珠(zhu)，棄(qi)上清。再重復洗兩次。

8.變性洗脫：向離心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣(yang)品置于 100℃水浴或(huo)者金屬(shu)浴中加熱 10 min。通過磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保(bao)持(chi)蛋白活(huo)性，也可采用(yong)以下(xia)洗脫方式。

低(di) pH 洗脫：向(xiang)離(li)(li)心管(guan)中加(jia)入 100 µL Elution Buffer。保(bao)(bao)持混勻在室(shi)溫下孵育離(li)(li)心管(guan) 5-10 min。通過磁力分離(li)(li)磁珠，保(bao)(bao)留含有目的抗(kang)原(yuan)的上(shang)清。每 100 µL 洗出液中加(jia)入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低(di) pH。

注意事項

1.本產(chan)品僅限于(yu)科學實驗(yan)研究使用，不得用于(yu)臨床診(zhen)斷、治療等領域(yu)。

2.請勿高速(su)離心、干燥(zao)或冷凍磁(ci)珠，這些操作會(hui)導(dao)致磁(ci)珠聚集而降(jiang)低結合(he)能力。

3.IP 實(shi)驗(yan)中不(bu)同類(lei)型的抗(kang)體與抗(kang)原(yuan)結合(he)的親和性是有區別(bie)的，抗(kang)體與抗(kang)原(yuan)結合(he)還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的影(ying)響(xiang)，因此，如使用本(ben)實(shi)驗(yan)步驟(zou)不(bu)能獲得(de)最(zui)佳(jia)的實(shi)驗(yan)結果，可(ke)自(zi)行優化操作細節或(huo)者篩選及配制(zhi)緩沖(chong)液進行實(shi)驗(yan)，推薦(jian)使用李(li)記生物的相關產(chan)品(pin)，參照相關產(chan)品(pin)推薦(jian)。

4.微(wei)球(qiu)使用(yong)前應充(chong)分振蕩均(jun)勻。微(wei)球(qiu)應保存在儲存溶液中，防止干燥。

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