1.具有高效的蛋白結合能力。

2.超低非特異性吸附的性能。

3.配合磁力架操作省時、簡便、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基，用 PBS 洗細胞兩次。

2.收集細胞至 1.5 mL EP 管內，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時加入 PMSF 等相應的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液，置于冰上以備后續實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

表 1.培養皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

2.用 PBS 洗細胞一次，即用 PBS 將細胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞。每 50mg 細胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入 PMSF 等相應的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上清液，置于冰上以備后續實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為 50~150 µg/mL，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品所需的量和孵育時間均依賴于每個特定的抗體-抗原體系，因而可能需要優化才能得到最大產量。

以下實驗方案針對 2-10μg 親和純化的抗體，根據需要可以按比例放大。

1.在離心管中，將每個樣品的細胞裂解液與 2-10μg 免疫沉淀抗體結合。每個免疫沉淀反應推薦的總蛋白量為 500-1500μg。

2.用 IP Lysis/Wash Buffer 將抗體以及制備好的樣品稀釋至 300-500μL。

3.在室溫下孵育 1-2 h，或 4 ℃過夜，以形成免疫復合物。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均勻分布，使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-Myc Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心管中。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔混勻。

3.將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊。去除上清。

4.向離心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻 1min。用磁力架

收集磁珠。去除上清。

5.將抗原樣品/抗體混合物加入裝有磁珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育 1-2 h。

6.用磁力架收集磁珠，除去未結合的樣品，保存以備分析。

7.向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收集磁珠，棄上清。再重復洗兩次。

8.變性洗脫：向離心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于 100℃水浴或者金屬浴中加熱 10 min。通過磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式。

低 pH 洗脫：向離心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管 5-10 min。通過磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液中加入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低 pH。

注意事項

1.本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會導致磁珠聚集而降低結合能力。

3.IP 實驗中不同類型的抗體與抗原結合的親和性是有區別的，抗體與抗原結合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的影響，因此，如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結果，可自行優化操作細節或者篩選及配制緩沖液進行實驗，推薦使用李記生物的相關產品，參照相關產品推薦。

4.微球使用前應充分振蕩均勻。微球應保存在儲存溶液中，防止干燥。

相關產品推薦

1XPBS（無菌）（貨號：AC08L011）

Western/IP 細胞裂解液（帶抑制劑） （貨號：AP01L076）

蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x）（貨號： AP14L036）