Anti-HA免疫磁珠將高(gao)質量的(de)鼠(shu)源單克隆(long)Anti-HA抗體共價偶(ou)聯(lian)在超(chao)順磁性(xing)納米微球表面,可特異性(xing)地(di)與(yu)動植物(wu)或(huo)微生物(wu)裂解液、血清、腹水等中(zhong)含有 HA 標簽的(de)蛋(dan)白(bai)結合，從而用于帶有 HA 標簽的(de)融(rong)合蛋(dan)白(bai)或(huo)其蛋(dan)白(bai)復合物(wu)的(de)免疫(yi)沉(chen)淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫(yi)共沉(chen)淀(Co-IP)或(huo)純化。

Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA 磁(ci)珠)，可以特異性地結合(he) HA 標簽融合(he)蛋(dan)白，并可以借助磁(ci)力架等磁(ci)分離(li)設備非常便捷地應用于帶有 HA 標簽的(de)融合(he)蛋(dan)白或其(qi)蛋(dan)白復合(he)物(wu)的(de)免疫沉淀或純化等實驗。

產品優勢

1.具有高效的蛋(dan)白結合能(neng)力。

2.超低非特異性(xing)吸附的性(xing)能。

3.配合磁力架(jia)操作省時、簡便、溫和(he)。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培(pei)養基，用(yong) PBS 洗(xi)細胞兩次(ci)。

2.收集(ji)細胞至(zhi) 1.5 mL EP 管內，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時加入 PMSF 等相應的抑制劑，混(hun)勻后置于冰上靜(jing)置 5-20 min（期(qi)間混(hun)勻幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液，置于(yu)冰(bing)上以(yi)備后續(xu)實驗（或置于(yu)-80 ℃長期保存(cun)）。

表 1.培(pei)養皿(min) IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上(shang)清。

2.用(yong) PBS 洗(xi)細胞一(yi)次，即用(yong) PBS 將細胞團(tuan)重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收(shou)集細胞，棄上清。

3.用(yong)預(yu)冷(leng)的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞。每 50mg 細胞使用(yong) 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時(shi)加入 PMSF 等(deng)相應的抑制劑，混勻后置(zhi)于冰上靜置(zhi) 5-20 min（期間混勻幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上(shang)清液，置于(yu)冰上(shang)以(yi)備后續實驗（或置于(yu)-80 ℃長期(qi)保存）。

血清樣品

一般(ban)建(jian)(jian)議建(jian)(jian)議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至(zhi)目標蛋白終(zhong)濃度為 50~150 µg/mL，置于(yu)冰上(shang)備用（或置于(yu)-20 ℃長期(qi)保存）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品所需(xu)(xu)的量(liang)和(he)孵育時間(jian)均依賴于(yu)每個特定(ding)的抗(kang)體-抗(kang)原體系，因(yin)而(er)可能需(xu)(xu)要優化才(cai)能得到最大產(chan)量(liang)。

以(yi)下實驗方案針對 2-10μg 親和純化的抗體，根(gen)據需(xu)要(yao)可以(yi)按比例放大(da)。

1.在離心(xin)管中，將每個(ge)樣品的細胞裂解液與 2-10μg 免疫(yi)沉(chen)淀抗體結合(he)。每個(ge)免疫(yi)沉(chen)淀反應(ying)推(tui)薦(jian)的總(zong)蛋白量為 500-1500μg。

2.用(yong) IP Lysis/Wash Buffer 將(jiang)抗體以及(ji)制備好的樣品(pin)稀(xi)釋至(zhi) 300-500μL。

3.在(zai)室溫(wen)下(xia)孵育 1-2 h，或 4 ℃過夜，以形成(cheng)免疫復(fu)合物。

免疫沉淀

【注】：為(wei)保證磁珠均勻(yun)分布，使(shi)用前通過(guo)反復顛倒或輕微渦(wo)旋混勻(yun)瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-HA Magnetic Beads 加入(ru) 1.5 mL 離(li)心管中。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔(rou)混勻。

3.將離心管放入磁(ci)(ci)力(li)架(jia)中收集磁(ci)(ci)珠到離心管的一(yi)邊。去除上清。

4.向離(li)心管中加入(ru) 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛(dian)倒(dao)離(li)心管數次(ci)或輕微渦旋混勻(yun) 1min。用磁(ci)力(li)架收集磁(ci)珠。去除上清。

5.將(jiang)抗原樣品/抗體混合物加入裝(zhuang)有磁珠的離心管中，保持(chi)混勻室(shi)溫下孵育(yu) 1-2 h。

6.用磁(ci)力架收集磁(ci)珠，除去未結合的樣品，保存(cun)以備分析。

7.向(xiang)離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收集(ji)磁珠，棄上清。再重復洗兩(liang)次。

8.變性洗脫：向離心管中加(jia)入(ru) 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣(yang)品置于 100℃水浴或者金屬浴中加(jia)熱 10 min。通過磁力(li)架分離磁珠，保留含有(you)目的(de)(de)抗原的(de)(de)上清。

【注(zhu)】：如需保(bao)持蛋(dan)白活(huo)性，也(ye)可采用以下洗脫(tuo)方式(shi)。

低(di) pH 洗脫：向離心(xin)管(guan)中加入 100 µL Elution Buffer。保(bao)持(chi)混(hun)勻在室溫下孵育離心(xin)管(guan) 5-10 min。通過磁(ci)力分(fen)離磁(ci)珠(zhu)，保(bao)留含有目的抗(kang)原的上清。每(mei) 100 µL 洗出液中加入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低(di) pH。

注意事項

1.本產品僅限于科學實驗研(yan)究(jiu)使用(yong)，不得用(yong)于臨床診斷、治療等領(ling)域。

2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會導(dao)致磁珠聚集(ji)而(er)降低結合能力。

3.IP 實(shi)驗(yan)中不同類型的(de)抗體與抗原結(jie)合(he)的(de)親(qin)和性是有(you)區別的(de)，抗體與抗原結(jie)合(he)還會受到(dao) IP Lysis/WashBuffer 的(de)影(ying)響，因此，如使用本實(shi)驗(yan)步(bu)驟(zou)不能獲得最佳的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果，可自行(xing)(xing)優化操作細(xi)節或者篩選及配制緩沖(chong)液進行(xing)(xing)實(shi)驗(yan)，推(tui)薦(jian)使用李記生物的(de)相關(guan)產品，參(can)照相關(guan)產品推(tui)薦(jian)。

4.微球使用前應(ying)充分振蕩(dang)均勻(yun)。微球應(ying)保存(cun)在儲存(cun)溶液中，防止干(gan)燥。

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