Anti-Flag免疫磁珠將高質(zhi)量的鼠(shu)源單(dan)克隆Anti-Flag抗體共(gong)價偶聯在超(chao)順磁(ci)(ci)性(xing)納米微(wei)球表面,可(ke)特異性(xing)地(di)與動植物或(huo)微(wei)生物裂解液、血清、腹(fu)水(shui)等中含(han)有 Flag 標(biao)簽的蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)結合(he)(he)，從(cong)而(er)用于(yu)(yu)帶有 Flag 標(biao)簽的融合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)或(huo)其蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)復合(he)(he)物的免疫(yi)沉(chen)淀(dian)(dian)(Immunoprecipitation, IP)、免疫(yi)共(gong)沉(chen)淀(dian)(dian)(Co-IP)或(huo)純化(hua)。Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag 磁(ci)(ci)珠)，也被稱為 Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads，可(ke)以(yi)特異性(xing)地(di)結合(he)(he) Flag 標(biao)簽融合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)，并可(ke)以(yi)借助磁(ci)(ci)力(li)架等磁(ci)(ci)分離設備非常(chang)便捷地(di)應用于(yu)(yu)帶有 Flag 標(biao)簽的融合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)或(huo)其蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)復合(he)(he)物的免疫(yi)沉(chen)淀(dian)(dian)或(huo)純化(hua)等實驗。

產品優勢

1.具有高(gao)效的蛋白(bai)結(jie)合能力。

2.超(chao)低非特異性吸(xi)附的(de)性能。

3.配合磁力架(jia)操作(zuo)省(sheng)時、簡便、溫和(he)。

4.產品穩定性高。

訂購信息

運輸與保存

常(chang)溫運輸。4℃保存，有效期(qi) 24 個月(yue)。

技術參數

使用方法

貼壁細胞樣品

1.移去培養基，用 PBS 洗細胞兩(liang)次。

2.收(shou)集(ji)細胞(bao)至 1.5 mL EP 管內，按比例(li)加入(ru) IP Lysis/Wash Buffer，同時加入(ru) PMSF 等相應的抑(yi)制劑，混勻(yun)后置于冰上靜置 5-20 min（期間(jian)混勻(yun)幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集(ji)上(shang)清液，置于冰上(shang)以備后續實(shi)驗(yan)（或(huo)置于-80 ℃長期保存）。

表(biao) 1.培養皿(min) IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收(shou)集細胞，棄上清(qing)。

2.用 PBS 洗細胞一次，即用 PBS 將細胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

3.用(yong)預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞。每 50mg 細胞使用(yong) 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加(jia)入 PMSF 等(deng)相應(ying)的抑制劑，混勻后置于冰上靜(jing)置 5-20 min（期(qi)間混勻幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上清液(ye)，置于冰上以備(bei)后續實驗（或置于-80 ℃長期保(bao)存）。

血清樣品

一般建(jian)議(yi)建(jian)議(yi)用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋(shi)血清(qing)樣品至目標蛋(dan)白終濃度為 50~150 µg/mL，置于(yu)冰上備用（或置于(yu)-20 ℃長期保存）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品所需(xu)的(de)量和孵育時間均依(yi)賴于每個特定的(de)抗體-抗原體系，因(yin)而可能需(xu)要優化(hua)才(cai)能得到最(zui)大產量。

以(yi)下實驗(yan)方案針對(dui) 2-10μg 親和(he)純化的抗體，根據需要可以(yi)按(an)比例放大。

1.在離心(xin)管中，將(jiang)每個樣(yang)品(pin)的細(xi)胞裂解液與 2-10μg 免(mian)疫沉(chen)淀(dian)抗體(ti)結合(he)。每個免(mian)疫沉(chen)淀(dian)反(fan)應推薦的總蛋白量為 500-1500μg。

2.用 IP Lysis/Wash Buffer 將抗(kang)體以及制備好(hao)的(de)樣品稀釋至 300-500μL。

3.在室溫下(xia)孵育 1-2 h，或 4 ℃過(guo)夜，以形成免疫復合物。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均勻分(fen)布，使用前通過(guo)反(fan)復顛倒(dao)或(huo)輕(qing)微渦旋混(hun)勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-Flag Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心管中(zhong)。

2.向(xiang)磁(ci)珠中加入 500 µL 預(yu)冷 PBS，輕(qing)柔混勻(yun)。

3.將離心管放入磁力架中(zhong)收集磁珠到離心管的一邊。去除上清。

4.向離心管中加入(ru) 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒(dao)離心管數(shu)次(ci)或輕微(wei)渦旋混勻 1min。用磁力架收集磁珠。去除(chu)上清(qing)。

5.將(jiang)抗(kang)原(yuan)樣品(pin)/抗(kang)體(ti)混合物加入裝有(you)磁珠的離心管中，保(bao)持混勻室溫(wen)下孵育 1-2 h。

6.用磁(ci)力架收集磁(ci)珠，除去未結(jie)合(he)的樣(yang)品(pin)，保(bao)存以備分析。

7.向(xiang)離心管中加(jia)入(ru) 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混(hun)勻。收集磁珠，棄上清。再(zai)重復洗兩(liang)次(ci)。

8.變性洗脫：向離(li)心(xin)管中加(jia)入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣(yang)品(pin)置(zhi)于 100℃水(shui)浴或者金(jin)屬(shu)浴中加(jia)熱 10 min。通過磁力架分離(li)磁珠，保(bao)留含有目的抗原的上清。

【注】：如需(xu)保持蛋(dan)白活性，也(ye)可采用以下洗脫方式。

低 pH 洗脫：向離心管(guan)中(zhong)加入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下(xia)孵育離心管(guan) 5-10 min。通過磁力分(fen)離磁珠，保留(liu)含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液中(zhong)加入 20 µL Neutralization Buffer 來中(zhong)和低 pH。

注意事項

1.本產品僅限于科學實驗(yan)研究使(shi)用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.請(qing)勿(wu)高速離心(xin)、干(gan)燥或(huo)冷凍磁珠，這些(xie)操作會導致磁珠聚集而降低結合能(neng)力。

3.IP 實驗(yan)中不(bu)同類型(xing)的(de)抗體(ti)與抗原結合的(de)親和(he)性是有(you)區(qu)別的(de)，抗體(ti)與抗原結合還會受到(dao) IP Lysis/Wash Buffer 的(de)影響(xiang)，因此，如使用本實驗(yan)步驟不(bu)能(neng)獲得最佳的(de)實驗(yan)結果(guo)，可(ke)自(zi)行優化操作(zuo)細(xi)節或者篩選及配制(zhi)緩沖液(ye)進行實驗(yan)，推(tui)薦使用李記生物的(de)相(xiang)關產(chan)品，參照相(xiang)關產(chan)品推(tui)薦。

4.微(wei)球使用前(qian)應充分振蕩(dang)均勻(yun)。微(wei)球應保存在儲存溶液中(zhong)，防止干燥。

相關產品推薦

1XPBS（無菌(jun)）（貨號：AC08L011）

Western/IP 細胞裂解液（帶(dai)抑制(zhi)劑） （貨號：AP01L076）

蛋白示蹤上(shang)樣(yang)緩沖液（5 x）（貨號： AP14L036）