產品描述
　　NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫(wen)和的細(xi)胞組(zu)織裂解液(ye)，主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等(deng)多種抑(yi)制。對胞(bao)漿(jiang)亞組分(fen)、胞(bao)核(he)成分(fen)均有較(jiao)強裂(lie)解作用，有利(li)于胞(bao)漿(jiang)蛋白、核(he)蛋白、胞(bao)漿(jiang)磷酸化(hua)蛋白及細(xi)胞(bao)核(he)轉錄(lu)因子的提(ti)取(qu)。適用于常規的Western、IP和co-IP等(deng)實驗蛋白樣品的制備。
訂購信息

產(chan)品組分

保(bao)存方(fang)法
　　裂解液(ye)4℃保(bao)存(cun)，其(qi)余-20℃保(bao)存(cun)，保(bao)質(zhi)期一年。
使用方法

對于(yu)貼壁(bi)細胞(bao)：去除(chu)培(pei)養液，用(yong)PBS、生理(li)鹽(yan)水(shui)或無血(xue)清(qing)培(pei)養液洗一遍(如果(guo)血(xue)清(qing)中的(de)蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入(ru)150~250 μL裂(lie)解液的(de)比例(li)加入(ru)裂(lie)解液。用(yong)槍(qiang)吹打(da)數下，使裂(lie)解液和細胞(bao)充分接觸。通(tong)常裂(lie)解液接觸細胞(bao)1~2秒后，細胞(bao)就會被裂(lie)解。
對于懸浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：離(li)心收集細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，按照6孔板每孔細(xi)(xi)胞(bao)(bao)加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細(xi)(xi)胞(bao)(bao)。充分裂解后(hou)應沒有明(ming)顯的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)沉淀。如果細(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)較多，必需分裝成50~100萬細(xi)(xi)胞(bao)(bao)/管，然后(hou)再裂解。具體NP-40裂解液的使用量(liang)參照表1。

2. 對(dui)于組織樣品
(1) 把組織*切(qie)成細小的碎片(pian)；
(2) 融解NP-40裂(lie)解液(ye)，混(hun)勻。取(qu)適當量(liang)的裂(lie)解液(ye)，在使用前數分鐘(zhong)內加入(ru)PMSF，使PMSF的終(zhong)濃(nong)度為(wei)1mM。
(3) 按(an)照每(mei)20 mg組織(zhi)加(jia)入150~250 μL裂(lie)解液(ye)的(de)比(bi)例加入(ru)裂(lie)解液(ye)。如(ru)果裂(lie)解不充(chong)分可以適(shi)當(dang)(dang)添加更多的(de)裂(lie)解液(ye)，如(ru)果需要高濃度的(de)蛋白樣(yang)品，可以適(shi)當(dang)(dang)減少裂(lie)解液(ye)的(de)用量。
(4) 用(yong)玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂(lie)解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續的(de)PAGE、Western和免疫沉(chen)淀等操作(zuo)。
注(zhu)意事項

然后同樣離心取(qu)上清，用于后續實驗。直(zhi)接裂解(jie)的(de)優點是(shi)比較(jiao)方便，不(bu)必使用勻(yun)漿器(qi)，缺點是(shi)不(bu)如使用勻(yun)漿器(qi)那樣裂解(jie)得比較(jiao)充分(fen)。

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