產品描述
　　SDS細胞裂解液（帶抑制劑）是一種比較強烈的細胞組織裂解液，通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解，特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。本產品具有有強烈的蛋白變性作用，不能用于非變性蛋白方面的研究。本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、染色質免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。
訂(ding)購信息

產(chan)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保(bao)存(cun)，其余-20℃保(bao)存(cun)，保(bao)質期一年。
使用方法
1. 對于培養細胞樣品

對于貼壁細(xi)胞：去除培(pei)養液(ye)，用PBS、生理鹽水或無血清培(pei)養液(ye)洗(xi)一遍(如果血清中的蛋(dan)白沒有干擾(rao)，可以不洗(xi))。按照6孔(kong)板每孔(kong)加入150~250 μL裂(lie)(lie)(lie)解液(ye)(ye)的比例加入裂(lie)(lie)(lie)解液(ye)(ye)。用槍吹打數下，使裂(lie)(lie)(lie)解液(ye)(ye)和細(xi)胞充分接觸。通常裂(lie)(lie)(lie)解液(ye)(ye)接觸細(xi)胞1~2秒(miao)后(hou)，細胞就會(hui)被裂解(jie)。如果(guo)用于ChIP，初步(bu)裂解(jie)后(hou)需在冰(bing)浴上繼續裂解(jie)10 min。
對于懸浮細胞(bao)：離心收集細胞(bao)，用手(shou)指把細胞(bao)用力彈散(san)。按照6孔板(ban)每孔細胞(bao)加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用(yong)手指輕(qing)彈以充分裂解細(xi)胞。如果細(xi)胞量較多(duo)，必需分裝(zhuang)成50~100萬細胞(bao)/管，然后(hou)(hou)再裂解(jie)。充(chong)分(fen)裂解(jie)后(hou)(hou)應沒有(you)明顯的細胞(bao)沉淀。如果用于ChIP，初步裂解(jie)后(hou)(hou)需(xu)在冰(bing)浴上繼續裂解(jie)10分(fen)鐘。具體(ti)SDS細胞裂解液的使(shi)用量(liang)參照表(biao)1.
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jin)行后(hou)續的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對于(yu)組織樣品：
(1) 把組織(zhi)*切(qie)成(cheng)細小的碎片。
(2) 融解SDS細胞裂解(jie)液，混(hun)勻。取(qu)適(shi)當量的裂解(jie)液，在使用(yong)前數分鐘內(nei)加入(ru)PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照(zhao)每20毫克(ke)組(zu)織加入150—250μL裂解(jie)(jie)液的(de)(de)比例加入裂解(jie)(jie)液，如(ru)果裂解(jie)(jie)不充分可以適當(dang)添加更多的(de)(de)裂解(jie)(jie)液，如(ru)果需要高濃度(du)的(de)(de)蛋白樣品，可以適當(dang)減(jian)少裂解(jie)(jie)液的(de)(de)用量。具體(ti)SDS細胞(bao)裂解(jie)(jie)液的(de)(de)用量參照(zhao)表1。
(4) 用(yong)玻璃勻(yun)漿器勻(yun)漿，直至充分(fen)裂解(jie)。如果(guo)用(yong)于(yu)ChIP，初步裂解(jie)后需在冰(bing)浴(yu)上繼續裂解(jie)10分(fen)鐘。
(5) 充分(fen)裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可(ke)進行后續(xu)的PAGE、Western和ChIP等操作(zuo)。
注意事(shi)項

表1 :SDS細胞裂解液的(de)使用量

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