RIPA裂解液 （強）

產品描述
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質，對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用。適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。
本產品(pin)不(bu)含PMSF組分。
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運輸與保存
常(chang)溫(wen)運輸。4℃保存，有(you)效(xiao)期12個(ge)月。
使(shi)用方法(fa)
貼(tie)壁細胞
1.      取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混(hun)合物(100×，不含(han)EDTA) （貨號(hao):AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2.      去除(chu)細(xi)胞(bao)培養液(ye)(ye)，用預冷的(de) PBS 洗滌兩次(ci)。按照6孔板每孔加(jia)入(ru)150-200ul 的(de)裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液(ye)(ye)的(de)比例均(jun)勻加(jia)入(ru)裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液(ye)(ye)，如果細(xi)胞(bao)密度過高可增加(jia)裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液(ye)(ye)的(de)量至250-300 uL。【注】：裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液(ye)(ye)過少會使細(xi)胞(bao)裂(lie)(lie)解(jie)(jie)不充分(fen)，影(ying)響蛋(dan)白提(ti)取(qu)的(de)質(zhi)量。
3.      用槍(qiang)吹打數(shu)(shu)下，冰(bing)上放(fang)置(zhi)10 min，期間每(mei)隔2 min用槍(qiang)吹打數(shu)(shu)下。
4.      轉移細胞(bao)裂(lie)解液于(yu)1.5 mL EP管中。
5.      12,000 g，4℃ 離心5min。
6.      收集上清。
懸浮細胞
1.      取適量裂解液，加入蛋(dan)白酶抑制劑混合物(100×，不含(han)EDTA) （貨號:AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2.      收集細胞0.5~2x10⁷于1.5mL離心管中，1mL預冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3 min，棄上清，重復三次。
3.      按照6孔板(ban)每(mei)孔加入(ru)150-200uL 的(de)裂(lie)解液(ye)的(de)比例(li)均勻加入(ru)裂(lie)解液(ye)，如果(guo)細胞密度過高可增加裂(lie)解液(ye)的(de)量至250-300uL。【注】：裂(lie)解液(ye)過少會(hui)使(shi)細胞裂(lie)解不(bu)充分，影響蛋白提(ti)取的(de)質(zhi)量。
4.      用(yong)槍(qiang)吹打數下并劇烈震蕩(dang)，冰上放置(zhi)10 min，期間每隔2 min震蕩(dang)一次。
5.      12,000 g，4℃ 離(li)心5 min。
6.      收集上清。
組織(zhi)樣品
1.      把組(zu)織*成細小的碎(sui)片。
2.      取適量裂解液，加入蛋白酶抑(yi)制劑混合物(100×，不含EDTA) （貨號:AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
3.      按照每100mg組織加(jia)入1mL裂解(jie)(jie)液(ye)的比例加(jia)入裂解(jie)(jie)液(ye)（如裂解(jie)(jie)不充(chong)分可(ke)適(shi)當增加(jia)裂解(jie)(jie)液(ye)，如果(guo)需(xu)要(yao)增加(jia)蛋(dan)白(bai)濃度可(ke)適(shi)當減(jian)少使用的裂解(jie)(jie)液(ye)體(ti)積(ji)）。
4.      用勻漿(jiang)器勻漿(jiang)，直至充(chong)分(fen)裂解（為防止蛋白降解請于冰上操作）。
5.      12,000 g，4℃ 離心(xin)5 min。
6.      收集上清。
注意(yi)事項

1. 本產品僅限于(yu)科學實驗研究使用，不(bu)得用于(yu)臨(lin)床診斷、治(zhi)療等領域。

2. 如需檢測磷酸化蛋白，則需要額外添加磷酸酶(mei)抑制劑II cocktail（50×）(貨(huo)號:AP03L025) 。

3. RIPA裂解液的裂解產(chan)物(wu)(wu)中(zhong)經(jing)常會出現(xian)一(yi)小(xiao)團透(tou)明膠(jiao)(jiao)狀物(wu)(wu)，屬(shu)正常現(xian)象。該透(tou)明膠(jiao)(jiao)狀物(wu)(wu)為(wei)含有基因(yin)(yin)(yin)組DNA等的復合(he)物(wu)(wu)。在不檢(jian)測(ce)基因(yin)(yin)(yin)組DNA結(jie)合(he)特別(bie)緊密(mi)的蛋白的情況下，可以(yi)直接離(li)心(xin)取上清用于(yu)后續實(shi)驗；如果(guo)需要檢(jian)測(ce)和基因(yin)(yin)(yin)組結(jie)合(he)特別(bie)緊密(mi)的蛋白，則可以(yi)通(tong)過(guo)超聲(sheng)處(chu)理打(da)碎打(da)散該透(tou)明膠(jiao)(jiao)狀物(wu)(wu)，隨后離(li)心(xin)取上清用于(yu)后續實(shi)驗。如果(guo)檢(jian)測(ce)一(yi)些(xie)常見(jian)的轉錄因(yin)(yin)(yin)子(zi)(zi)，例如NF-kappaB、p53等時，通(tong)常不必(bi)進行超聲(sheng)處(chu)理，就可以(yi)檢(jian)測(ce)到(dao)這(zhe)些(xie)轉錄因(yin)(yin)(yin)子(zi)(zi)。

4. RIPA（強(qiang)）裂解液含有(you)較高濃度的去垢劑，不能用(yong)Bradford法測定蛋白。

5. 如(ru)果組織樣(yang)品(pin)本身非常細小(xiao)，可(ke)以適當(dang)剪切后(hou)(hou)直(zhi)接加入裂(lie)解(jie)(jie)液裂(lie)解(jie)(jie)，通過強(qiang)烈vortex使樣(yang)品(pin)裂(lie)解(jie)(jie)充分。然后(hou)(hou)同樣(yang)離心取上清，用(yong)于后(hou)(hou)續實驗。直(zhi)接裂(lie)解(jie)(jie)的優點是(shi)比(bi)較方便，不(bu)(bu)必(bi)使用(yong)勻(yun)漿器，缺點是(shi)不(bu)(bu)如(ru)使用(yong)勻(yun)漿器那樣(yang)裂(lie)解(jie)(jie)得(de)比(bi)較充分。

6. 通常6孔(kong)板每孔(kong)細胞(bao)加入(ru)150 μL裂解液已經足夠，但如果細胞(bao)密度(du)非常高(gao)可以適當加大(da)裂解液的(de)用量到200 μL或250 μL。

表1: RIPA裂解液的使用量(liang)

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