EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒

產品描述

和元李記EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒（EZ Trans Lentiviral Infection Kit）包(bao)(bao)(bao)含：慢(man)(man)病(bing)毒(du)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)質(zhi)(zhi)粒(li)、對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)質(zhi)(zhi)粒(li)、轉染(ran)試劑（EZ Trans Regent）、慢(man)(man)病(bing)毒(du)濃縮液、慢(man)(man)病(bing)毒(du)感染(ran)增(zeng)強劑等必要組(zu)份，可一(yi)站式高效完成病(bing)毒(du)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)到感染(ran)細胞(bao)的全部(bu)過(guo)程。和(he)元李記慢(man)(man)病(bing)毒(du)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)試劑盒（Lentiviral Infection Kit）提供(gong)足量、優(you)質(zhi)(zhi)的對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)質(zhi)(zhi)粒(li)和(he)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)質(zhi)(zhi)粒(li)，省去實(shi)驗(yan)人員抽提質(zhi)(zhi)粒(li)的工作可快速包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)病(bing)毒(du)感染(ran)細胞(bao)。

和(he)元(yuan)(yuan)李(li)記慢(man)病(bing)毒(du)(du)載體(ti)(ti)(ti)表(biao)(biao)達(da)系統(tong)(tong)由pLenti慢(man)病(bing)毒(du)(du)載體(ti)(ti)(ti)和(he)Lentiviral Mix質粒組成。pLenti慢(man)載體(ti)(ti)(ti)中含有HIV基本元(yuan)(yuan)件5’LTR和(he)3’LTR以及WPRE等其他輔助元(yuan)(yuan)件，表(biao)(biao)達(da)框為U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含綠(lv)色熒光和(he)puro真核抗性。客戶(hu)可(ke)以根據不同的實驗目的針(zhen)對(dui)plenti載體(ti)(ti)(ti)改造用于(yu)啟動子、基因功(gong)能(neng)功(gong)能(neng)研究，穩定株篩選等。Lentiviral Mix能(neng)夠表(biao)(biao)達(da)病(bing)毒(du)(du)包裝需(xu)要的各種必需(xu)原件，可(ke)以兼容(rong)第二(er)代(dai)和(he)第三代(dai)的慢(man)病(bing)毒(du)(du)包裝系統(tong)(tong)。

訂購信息

產品組分

運輸與保存

藍冰運輸。A、B組(zu)分-20℃保存(cun)，C、D、E組(zu)分4℃保存(cun)，有效期(qi)12個(ge)月。

使用方法

一(yi)、慢病毒包裝及純化濃縮（以10 cm培養皿為(wei)例，1皿為(wei)1T）

1.        細(xi)胞(bao)準(zhun)(zhun)備：293T細(xi)胞(bao)按照6×105cells/mL的(de)細(xi)胞(bao)密(mi)度傳(chuan)代到10cm培養皿中，第二(er)天細(xi)胞(bao)長(chang)到80%-85%時(shi)準(zhun)(zhun)備轉染。

2.        轉染前換液：轉染前1h將需(xu)要轉染的細(xi)胞更換新鮮的DMEM，10mL/皿。

3.        轉染：

(1)       取(qu)1.5ml EP管記為質粒(li)混合液(ye)（管A），加入500uL DMEM，16μL質粒(li)DNA（可自行改造）和22μL包裝質粒(li)，振蕩混勻；

(2)       另取1.5mL EP管記為轉染(ran)試劑(ji)混合液（管B），加入500uL DMEM，90μL 轉染(ran)試劑(ji)，振蕩混勻。

(3)       再將(jiang)管(guan)B緩(huan)慢加(jia)入(ru)到管(guan)A中(zhong)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)混勻，靜(jing)置8min形成復合物(wu)，后將(jiang)混合液均勻滴加(jia)到提前換好液的10cm培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)混勻，放入(ru)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。

4.        轉染后換液：轉染后6-8h，將(jiang)培(pei)養(yang)皿中的培(pei)養(yang)基吸掉，棄于廢液杯中，然后加入10mL 培(pei)養(yang)基（含有(you)血清和(he)抗生素）繼(ji)續培(pei)養(yang)。

5.        病(bing)毒收集(ji)：轉染48h后，吸取上(shang)清液于(yu)50mL 離心(xin)管中，4000rpm離心(xin)10min, 4℃，將上(shang)清液用(yong)0.45um過濾(lv)(lv)器(qi)過濾(lv)(lv)轉移到新的(de)(de)50mL 離心(xin)管中。此時上(shang)清液中的(de)(de)病(bing)毒顆粒可以直接去檢(jian)測滴度(du)(du)或者感染目的(de)(de)細胞，如果對(dui)病(bing)毒的(de)(de)滴度(du)(du)及純(chun)度(du)(du)有較(jiao)高要(yao)求，可進行(xing)后續操作。

6.        病(bing)毒(du)濃(nong)縮(suo)：每10mL 病(bing)毒(du)上清(qing)液加入2.5mL EZ慢病(bing)毒(du)濃(nong)縮(suo)液（CAT:AC04L442），混(hun)勻，4℃放置2h，4000rpm離心30min，吸棄上清(qing)。

7.        檢測及分裝(zhuang)：包裝(zhuang)好的(de)病毒可以(yi)直接檢測滴度，待(dai)用的(de)病毒用EZ病毒保護液重懸(xuan)分裝(zhuang)凍(dong)存。

二、慢病毒感染細胞(bao)（以293T細胞(bao)為例(li)，MOI值(zhi)為1）

1.         細(xi)胞鋪板：

(1)       將293T細胞配成5×104cells/mL細胞懸(xuan)液，待鋪板。

(2)       將上(shang)述細(xi)胞懸液接種到6孔板，每孔鋪2mL，即1×105cells/well。

2.         感染慢病(bing)毒：

(1)       鋪好板細胞培養(yang)12-20h，準備感染。

(2)       加病(bing)毒(du)，計(ji)算(suan)方法：(細胞(bao)數×MOI值/病(bing)毒(du)原液(ye)滴度)×103=病(bing)毒(du)量(μL)，加病(bing)毒(du)量見下表。

(3)       加感(gan)染(ran)增(zeng)強劑(ji)(ji)：每孔加10μL 1mg/mL 感(gan)染(ran)增(zeng)強劑(ji)(ji)，最終在(zai)細胞樣品中感(gan)染(ran)增(zeng)強劑(ji)(ji)的終濃度為(wei)5μg/mL，輕搖使增(zeng)強劑(ji)(ji)分散均(jun)勻。

(4)       換液：感染(ran)12-20h棄去培養(yang)(yang)基(ji)，每(mei)孔加入2mL 新鮮培養(yang)(yang)基(ji)。

3.         觀(guan)察：72h后觀(guan)察細胞狀態，根據情(qing)況(kuang)做開展后續實驗。（可選）

注意事項

1.         本(ben)產品僅限于科學實(shi)驗(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)，不得(de)用(yong)于臨床診(zhen)斷、治療等領域(yu)。

2.         所有慢病(bing)毒操作均應(ying)盡量在BSL2*生物(wu)安全柜中進行，并佩戴(dai)一次性*口罩和手套(tao)。

3.         病毒(du)切忌反復(fu)凍融(rong)，凍融(rong)一次病毒(du)滴度降低10%-20%左右。

4.         病(bing)毒(du)儲存6個月后，建議在使(shi)用前(qian)重新測(ce)定病(bing)毒(du)滴度。

5.  ;       若MOI值高于20時，建議(yi)感染(ran)增強劑使用體(ti)積(ji)為8μL/mL，提高轉染(ran)效率，一些特殊(shu)細胞(bao)不能(neng)加入感染(ran)增強劑。

6.         病毒(du)添加量(liang)(liang)與待感染(ran)細(xi)胞(bao)MOI值、病毒(du)滴度、目的基(ji)(ji)因產(chan)物(wu)對細(xi)胞(bao)毒(du)性有(you)關，病毒(du)添加量(liang)(liang)計算方(fang)法(fa)滿(man)足(zu)大多數(shu)實驗需要，實驗人(ren)員可在此基(ji)(ji)礎上摸索(suo)最佳(jia)病毒(du)添加量(liang)(liang)。

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