EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質體）

產品(pin)描述
EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質體）（以下簡稱(cheng)“EZ Trans Lipo"）為李(li)記(ji)生物(wu)新研發的細胞(bao)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染試劑，EZ Trans Lipo以納米脂質體包(bao)裹核酸通過特(te)殊遞送機制(zhi)，把(ba)外源DNA、RNA、siRNA轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)入各類細胞(bao)，能轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染貼壁細胞(bao)、懸浮細胞(bao)，還(huan)可(ke)用于(yu)siRNA和shRNA的基因(yin)(yin)敲除(chu)實(shi)驗(yan)及基因(yin)(yin)表達研究。
經過對(dui)近百種細胞(bao)對(dui)比測試，EZ Trans Lipo在絕大部分(fen)受檢細(xi)胞(bao)的轉(zhuan)染效(xiao)率、細(xi)胞(bao)毒(du)性表現均與進(jin)口型產品一致(zhi)或更優；具備轉(zhuan)染效(xiao)率高、細(xi)胞(bao)毒(du)性低、適(shi)用細(xi)胞(bao)廣、性價比高等優點。
訂購信息

運輸(shu)與(yu)保存
藍冰運輸。4℃保存，有(you)效期12個月(yue)。
使用方法
貼壁細胞（以293T細(xi)胞(bao)、96孔(kong)板為(wei)例(li)）
1.細胞準備
轉染前一天用1酶消化(hua)、鋪(pu)板，轉染當天細胞密度達到3.0x10⁵ 個細胞/mL時可進行轉染, 細(xi)胞匯合(he)度達到70%-80%，保證活細(xi)胞>90%。
2.準備(bei)DNA-EZ Trans Lipo復(fu)合物
（1）取兩支無菌EP管(平行樣(yang))，兩(liang)個EP管各(ge)加入5 μL不含抗生素和血(xue)清的MEM細(xi)胞培養液，然后每(mei)一管(guan)各加入EZ Trans Lipo轉(zhuan)染試劑(ji)0.15 μL，輕微吹吸使混(hun)和均(jun)勻(yun)。
（2）取一支(zhi)無菌EP管，加入10 μL不含抗生素(su)和血(xue)清的MEM細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，然(ran)后加(jia)入待轉DNA或質粒(li)，確保(bao)最(zui)終DNA量為0.2 μg，輕微(wei)吹吸使混和均(jun)勻(yun)。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培(pei)養液5μL加入稀釋好的EZ Trans Lipo的兩個EP管中(zhong), 輕(qing)輕(qing)吹打、晃(huang)動使混和(he)均勻，室溫靜置20 min形(xing)成DNA-EZ Trans Lipo 復合(he)物（室(shi)溫條件4 h內(nei)性質穩定）。
3.轉染細(xi)胞
把(ba)DNA-EZ Trans Lipo 復合(he)物全部加(jia)入(ru)到96孔板(ban)貼壁培養的293細胞中（試劑有重復樣）。逐滴分散加入，輕微晃動。
4.細胞(bao)檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物(wu)的細胞在 37℃ 培養1-3 d（無需特意(yi)更換培養液(ye)），根據實驗設計實時觀察或收獲細胞檢測。
 
表1：不同培(pei)養體(ti)積對應的待(dai)轉DNA、EZ Trans、稀釋液用量(liang)

 
 
 
懸浮細(xi)胞（以(yi)293FT細胞、1mL培養體積為例）
1.細胞準(zhun)備
細胞進(jin)行轉(zhuan)染當天，細胞密度達(da)到2-2.5x10⁶ 個/mL時可進行轉染，細胞重(zhong)懸后匯合度達到(dao)70%-80%，保證活細胞>90%。懸浮細胞細胞(bao)轉(zhuan)染可當天接種/鋪板(ban), 只要(yao)細胞(bao)狀態(tai)穩定即可進行。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合(he)物
（1）取兩支無菌EP管(平行樣)，兩個EP管各加(jia)(jia)入400μL不含抗生素和血(xue)清的(de)MEM細(xi)胞培養液(ye), 然每一管各加(jia)(jia)入EZ Trans Lipo轉染試劑15μL，輕微(wei)吹(chui)吸使混(hun)和(he)均(jun)勻(yun)。
（2）取一(yi)支無菌EP管，加(jia)入(ru)800μL不含抗生素和血(xue)清的MEM細胞培(pei)養液(ye)，然后(hou)加(jia)入(ru)待轉DNA或質粒，確保(bao)最終DNA量(liang)為20μg，輕微吹吸使(shi)混(hun)和均勻。
（3）分(fen)別吸取將上述含有DNA的培養(yang)液(ye)400μL加(jia)入(ru)到稀(xi)釋好(hao)的轉染試劑培養(yang)液(ye)的兩個EP管(guan)中, 輕(qing)輕(qing)吹打、晃動(dong)使混和均勻，室溫靜置(zhi)20 min（室溫條件4 h內性(xing)質穩定(ding)）。
3.轉染細(xi)胞
把DNA-EZ Trans Lipo復合物800μL全(quan)部加入到1 mL懸浮培養的293FT細胞中（有重復樣(yang)）。逐滴分散加入，輕微晃動。
4.細胞檢(jian)測(ce)
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的(de)細胞，37℃ 懸(xuan)浮培養(yang)細胞1-3 d（無需特意更換培養液），根據實(shi)(shi)驗設計實(shi)(shi)時(shi)觀(guan)察或收(shou)獲細胞檢測。
注意事項
1.本(ben)產品僅(jin)限于(yu)(yu)科學實驗研究使用，不得用于(yu)(yu)臨床診(zhen)斷、治療等領域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的轉(zhuan)染過(guo)程(cheng)不要求特(te)意(yi)更換，但由于雙抗會影響重組蛋白(bai)的表達(da)，為(wei)獲得(de)最佳表達(da)效果，建議在細胞轉染前2 h更換成(cheng)不含抗生素和血(xue)清的培(pei)養基，在轉后(hou)4-6 h換回含抗生素和血(xue)清的培(pei)養基。
3.質粒質量(liang)：請務必使用高質量(liang)轉(zhuan)染(ran)級無內毒素質粒。通過260 nm光吸收(shou)測定(ding)DNA 濃度，260nm / 280nm比值(zhi)確定(ding) DNA 純度（比值(zhi)應該在1.8～2.0的范(fan)圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
4.細胞條件：使用(yong)適當保存和經常傳(chuan)代的(de)健康(kang)細(xi)胞。確保培養基(ji)沒有被細(xi)菌(jun)、真菌(jun)或支原體污染(ran)。如果(guo)細(xi)胞是(shi)近期復蘇的(de)液氮凍存細(xi)胞，請(qing)在轉染(ran)前至(zhi)少傳(chuan)代兩次。建議使用(yong)GIBCO或者李(li)記生物的特級胎牛(niu)血清（Foetal Bovine Serum）（貨號(hao)：AC03L055）培(pei)養細胞。
5.為了(le)減少(shao)操作(zuo)誤差(cha)，上述操作(zuo)步驟設(she)定(ding)了(le)一(yi)個重復平行樣，用戶可根據實(shi)驗室(shi)(shi)目(mu)的和實(shi)驗室(shi)(shi)條件(jian)調整。
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