AB11L234-G418（遺傳霉素），也稱(cheng)作Geneticin (遺傳霉素(su))、G418、G 418或(huo)者(zhe)G-418，是一種結構(gou)類(lei)似于慶大霉素(su)B1(Gentamycin B1)的氨基(ji)糖苷類(lei)抗生素(su)，來源(yuan)于Micromonospora rhodorangea，常(chang)用于篩(shai)選表達(da)neo基(ji)因的真(zhen)核或(huo)原(yuan)核多克(ke)隆(long)或(huo)單(dan)克(ke)隆(long)細胞(bao)。

G418不僅用于穩定細胞株的篩選，也用于穩定細胞株的維持。本產品的50mg/ml包裝經過過濾除菌，可以直接用于細胞培養。

在細(xi)(xi)菌、酵母、原生動物(wu)、蠕蟲、高等植物(wu)和哺乳動物(wu)中(zhong)，遺傳(chuan)霉素通過抑制蛋(dan)白合成而(er)抑制或(huo)(huo)殺(sha)死細(xi)(xi)胞。其作用機制為遺傳(chuan)霉素能夠與70S和80S核(he)(he)糖體結合，從而(er)阻斷肽(tai)鏈延伸，干擾蛋(dan)白合成。其抗性基(ji)(ji)因(yin)(主要為neo基(ji)(ji)因(yin))位于轉座子Tn601 (903)或(huo)(huo)Tn5(來(lai)源于細(xi)(xi)菌)，可以在真核(he)(he)細(xi)(xi)胞中(zhong)表(biao)達。通過基(ji)(ji)因(yin)重組技術將這(zhe)些抗性基(ji)(ji)因(yin)導(dao)入細(xi)(xi)胞，使細(xi)(xi)胞表(biao)達抗性產(chan)物(wu)氨基(ji)(ji)糖苷磷(lin)酸(suan)轉移酶(amino-glycoside 3’-phosphotransferase, APH(3)II)，從而(er)獲得對G418的耐藥性，用來(lai)篩選和維持培養攜(xie)帶抗性基(ji)(ji)因(yin)的原核(he)(he)或(huo)(huo)者真核(he)(he)細(xi)(xi)胞。

哺乳動物(wu)細(xi)胞(bao)中(zhong)，當抗(kang)(kang)性(xing)基(ji)因neo被整(zheng)合進真核細(xi)胞(bao)基(ji)因組后 ,編碼表達氨(an)基(ji)糖苷(gan)磷酸轉移(yi)酶(mei)(amino-glycoside 3’-phosphotransferase, APH(3)II)。此酶(mei)通過共(gong)價修飾(shi)G418的(de)氨(an)基(ji)或(huo)羥基(ji)功能，抑制抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)-核糖體(ti)間(jian)的(de)相互(hu)作用，從而(er)使(shi)得抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)失(shi)活(huo)。這(zhe)一特性(xing)賦予細(xi)胞(bao)產生(sheng)抗(kang)(kang)性(xing)而(er)能在含有G418的(de)選擇性(xing)培養基(ji)中(zhong)生(sheng)長。進行(xing)穩轉細(xi)胞(bao)株(zhu)篩選實驗時，需要建立劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)確定殺(sha)死無(wu)抗(kang)(kang)性(xing)細(xi)胞(bao)的(de)zui低有效濃度(du)。

植物細胞中，通過轉染攜帶nptII基因的抗性質粒(li)孵育其抗性。nptII基因也能編(bian)碼(ma)表達氨(an)基糖苷磷酸(suan)轉移(yi)酶(mei)，這個酶(mei)使得(de)多種抗生素喪失活(huo)性，包(bao)括(kuo) G418，卡那霉素和巴龍霉素。

G 418與新霉素同為氨基(ji)糖苷(gan)類抗生(sheng)素，都可(ke)(ke)被Neo基(ji)因產物(wu)失活，因此都可(ke)(ke)以用(yong)于篩選(xuan)攜帶Neo抗性基(ji)因的細胞(bao)(bao)，新霉素篩選(xuan)的細胞(bao)(bao)都可(ke)(ke)以用(yong)G418替(ti)代。

訂購信息

常溫(wen)運輸。4℃保存，有效期36個月。

技術參數

1.CAS：108321-42-2

2.分子式：C20H40N4O10·2H2SO4  

4.分子(zi)量：692.71

5.純度：~98%
6.結構式：

AB11L234-G418（遺傳霉素）使用方法

1.G418儲存液的配制(50mg/ml，活性濃度)
（1）活力單位的換算
　　根據此公式進行換算：(1000/A0)×A1=A2，其中A0是G418的活力值(Potency)，因批次而異，具體見瓶子的標簽。A1是想配制的活性G418濃度。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
　　比如若所用批次的G418 活力值為：750µg/mg，要配制50mg/ml的G418活性濃度，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50mg/ml=66.33mg/ml。
　　如果配制10ml的G418儲存液(活性濃度，50mg/ml)，則需要稱取663.3mg粉末。
（2）除菌和保存
　　根據上述換算得到的實際粉末稱重量，加入10ml無菌去離子水使其*溶解。
　　先用5ml無菌去離子水預濕潤0.22μm針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾，除菌后分裝成單次使用的小量(如1ml)放到-20℃凍存，1年穩定。
【注】：不要對混濁的溶液進行過濾，因為混濁的溶液意味著藥物未*溶解，過濾過程中會造成藥物損失，降低活性；不建議使用液體培養基，NaCl，磷酸鹽溶液或者有機溶劑來制備儲存液；配制G418溶液時，一定要根據相應批次G418標注的活力值(potency)來進行換算，從而得到需要活性濃度的儲存液以及工作液。
2.建議使用濃度
　　一般來說，剛開始篩選轉化子需要高濃度的G418，并用一個較低濃度的G418維持培養。生長條件，細胞類型和其它的環境因素都可能影響G418的用量，因此第一次使用的實驗體系建議通過劑量反應性曲線(dose-response curve or kill curve)，來確定最佳篩選濃度。
　　通常情況，哺乳動物細胞(bao)篩選范圍(wei)200-2000μg/ml；植物細胞(bao)：10-100μg/ml；酵母細胞(bao)：500-1000μg/ml。

表1.部分哺乳動物細胞的推薦工作濃(nong)度表。

3.遺傳霉素劑量反應曲線的建立
　　遺傳霉素的有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，確定能夠殺死未轉染宿主細胞的遺傳霉素zui低濃度非常重要，對于初次使用的細胞，一般需要通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)，曲線建立時至少應設置6個遺傳霉素濃度。遺傳霉素處理分裂期的細胞時活性*，因此在添加遺傳霉素之前需要先將細胞培養一段時間。
（1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜。
注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
（2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定0、50、100、200、400、800、1000μg/ml。
（3）第二天：去除舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度遺傳霉素的培養基。每個濃度做三個平行孔。更換培養基后在細胞培養箱中繼續培養。
（4）接下來每3-4 d更換新的含藥物培養基。
（5）按照固定的周期(如每2 d)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10 d)內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
4.穩定轉染細胞株的篩選
（1）細胞轉染48h后，將細胞置于含有適當濃度遺傳霉素的新鮮培養基中培養，此為處理組。
（2）【注】：當細(xi)(xi)胞(bao)處于分裂(lie)活躍(yue)期(qi)時(shi)，抗(kang)生素作(zuo)用zui明顯。當細(xi)(xi)胞(bao)過(guo)于密集，抗(kang)生素產生的效力(li)會明顯下降，所以(yi)細(xi)(xi)胞(bao)的密度最好不(bu)超過(guo)25%。建議同時(shi)做一個(ge)正常(chang)細(xi)(xi)胞(bao)的對照(zhao)組(zu)。轉染或感染48 h后，如(ru)果細(xi)(xi)胞(bao)過(guo)密也可以(yi)消化后重新接種細(xi)(xi)胞(bao)，培養過(guo)夜(ye)后即可進行遺傳霉素篩(shai)選。每隔3-4 d更(geng)換(huan)含有遺傳霉素的培養液。

（3）篩選7 d后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達neo基因的細胞。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率不同，集落的形成可能需要一周或者更多的時間。
（4）克隆形成后，挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7 d。
（5）之后更換(huan)正常培(pei)養基培(pei)養即可。

注意事項

1.本產品僅限(xian)于科學實驗研究使(shi)用，不得用于臨床(chuang)診斷、治療等領域(yu)。

2.用(yong)于(yu)細胞(bao)實驗(yan)，溶(rong)解后(hou)，須用(yong)一次性針頭濾器過濾除菌。

3.本產品不可高(gao)壓滅菌。

4.G418不要和(he)其它(ta)抗(kang)生素(su)/抗(kang)真菌劑(如青霉(mei)素(su)/鏈霉(mei)素(su))共(gong)同使(shi)用，因(yin)為(wei)它(ta)們是G418的競(jing)爭性抑制(zhi)劑。其它(ta)的抗(kang)生素(su)也會(hui)產生交叉活(huo)性。

5.G418加入(ru)培養體(ti)系中，未轉(zhuan)染(ran)的細(xi)胞有可能(neng)不會被(bei)(bei)殺(sha)死，原因在于(yu)藥(yao)物濃度過(guo)低，或(huo)者細(xi)胞密度過(guo)高。另外，快速分裂的細(xi)胞相對于(yu)緩慢增殖細(xi)胞，更容易(yi)被(bei)(bei)殺(sha)死。對照細(xi)胞(未轉(zhuan)染(ran))可能(neng)在添加抗(kang)生素5-7 d后(hou)才(cai)能(neng)被(bei)(bei)殺(sha)死，轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞(抗(kang)性克隆子)的克隆需要10-14 d形成。

6.即(ji)使加(jia)入有(you)效(xiao)劑量的(de)G418，細胞可能會(hui)繼續分裂(lie)2-3次。G418的(de)藥(yao)效(xiao)通常在2 d后才變得明顯。

7.本產品可能對(dui)人體有一定的毒害(hai)作(zuo)用，請注(zhu)意(yi)適當防護，以避免直(zhi)接接觸人體或吸(xi)入體內。

8.為了您的安全(quan)和健康，請(qing)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuo)。

9.抗生素不穩定，請在有效期內盡快(kuai)使用。

10.以上(shang)數據均來自(zi)公開文獻, 李記(ji)生物暫未本產品(pin)進行獨立驗證, 僅(jin)供參(can)考(kao)。

相關產品推薦

Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素(su))（貨號：AB11L241）