產品描述
　　Quick Cell支原體快(kuai)速檢測試(shi)劑盒(細胞培養)是專門用于快速(su)檢測細胞(bao)培(pei)養上(shang)清(qing)或別的液體樣(yang)品(如血清(qing))中(zhong)是否存在支原體污染的試劑。本(ben)試劑盒操作(zuo)簡單，反應時間(jian)短，只需吸(xi)取1 μl細胞(bao)培養上清(qing)加入(ru)反應體系中，60℃孵育1h，肉眼觀察即可(ke)判定結果(guo)，與傳統(tong)檢測支(zhi)原體的PCR法優勢(shi)明顯。本試(shi)劑盒(he)檢(jian)測(ce)范圍(wei)廣，可以檢(jian)測(ce)：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見(jian)的(de)污染細胞(bao)的(de)支原體(M.為Mycoplasma的(de)縮寫)。以上13種支原體約占細(xi)胞支原體污染的(de)99%以上。絕大多數支(zhi)原體污染集中(zhong)于前(qian)8種(zhong)。因此非常(chang)適合(he)于與細胞生物學相關的(de)科研實(shi)驗室及企業的(de)日(ri)常(chang)支原(yuan)體檢測。【注】：快速(su)法不能檢測尿解(jie)，肺支(zhi)原體。
訂(ding)購信息

產品組分(fen)

【注】：①本試(shi)劑盒所指(zhi)50次(ci)測(ce)試(shi)包含陰性對照(zhao)(zhao)、陽(yang)性對照(zhao)(zhao)，并非(fei)50個樣(yang)品(pin)(pin)，因每次(ci)測(ce)試(shi)均需設置對照(zhao)(zhao)，測(ce)試(shi)樣(yang)品(pin)(pin)數(shu)(shu)根據(ju)實(shi)驗安(an)排確定，理論(lun)上一次(ci)最多可(ke)測(ce)試(shi)48個樣(yang)品(pin)(pin)。②使(shi)用(yong)前(qian)用(yong)離(li)心(xin)機輕微離(li)心(xin)，以免管壁上粘附損失試(shi)劑減少檢測(ce)次(ci)數(shu)(shu)。 （注：陽(yang)性支原體DNA無需離(li)心(xin)。)
運(yun)輸與(yu)保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效(xiao)期(qi)36個月。
實驗(yan)操作流程
1.待測細胞培養上清(qing)收集
為了準(zhun)確判(pan)斷(duan)細胞是否有支原體的污(wu)染，待(dai)測的細胞培(pei)養液樣品最(zui)好來源于(yu)至少培(pei)養3 d且匯(hui)合度(du)70-90%左右的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養(yang)上清(貼壁細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao))。懸浮(fu)培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)也需(xu)要(yao)在(zai)換(huan)液傳代后(hou)，至少(shao)讓細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)長3 d再取培(pei)養(yang)液進行檢(jian)測，哺乳動物(wu)細胞(bao)的(de)存在不會影(ying)響(xiang)(xiang)檢(jian)測結果(guo)。細胞(bao)培(pei)養(yang)上清(qing)可直接用于(yu)檢(jian)測，但樣(yang)品(pin)(pin)中如果(guo)含有EDTA等影(ying)響(xiang)(xiang)支原體DNA擴增(zeng)的(de)成分，建議進行樣(yang)品(pin)(pin)處(chu)理，處(chu)理過(guo)程如下(xia)：
樣品處理(li)：（1）根(gen)據濃縮倍數，可(ke)以取100-1500μL上(shang)述待測(ce)樣品(pin)到1.5 mL離(li)心管(guan)內(nei)，在(zai)普通臺式離(li)心機(ji)上(shang)1000 rpm低速離(li)心5 min，將(jiang)離(li)心后的(de)(de)上(shang)清(qing)(qing)轉移到另一個(ge)離(li)心管(guan)內(nei)，丟棄細(xi)胞沉淀。（2）將(jiang)上(shang)清(qing)(qing)繼(ji)續(xu)13000 rpm（約 16000 g）高速離(li)心 5 min，小心吸(xi)走全部上(shang)清(qing)(qing)，用(yong) 50 μL 5 mM Tris-HCl, pH 8.5（樣品(pin)可(ke)以長期保(bao)存。推薦(jian)）或(huo)者去離(li)子水重懸(xuan)沉淀（沉淀中含有支原體(ti)），吹(chui)吸(xi)均勻（如果最初使用(yong)了1500 μL 的(de)(de)樣品(pin)，則支原體濃度大(da)約提高了30倍(bei)）。（3）該重懸(xuan)后(hou)的樣品(pin)可(ke)以(yi)(yi)直(zhi)接(jie)檢(jian)(jian)測，也可(ke)以(yi)(yi)進行(xing)熱處(chu)(chu)(chu)理(li)后(hou)再檢(jian)(jian)測（熱處(chu)(chu)(chu)理(li)后(hou)，樣品(pin)保(bao)存更穩定）。熱處(chu)(chu)(chu)理(li)過程：95 ℃加熱處(chu)(chu)(chu)理(li) 5 min（可(ke)以(yi)(yi)轉移到 PCR 管(guan)內，在 PCR 儀(yi)上進行(xing)加熱處(chu)(chu)(chu)理(li)），簡單離(li)心(xin)（1000 g，5 sec）后(hou)，取上清進行(xing)檢(jian)(jian)測。
【注】：收集的待(dai)測(ce)細胞培養液(ye)樣品(pin)如果不(bu)立即(ji)檢測(ce)，請放于-20℃或-80℃冰箱(xiang)(xiang)保存，不(bu)得(de)放于室(shi)溫或4℃冰箱(xiang)(xiang)。樣品(pin)在-20℃至少(shao)可以保存1個(ge)月，在-80℃可以(yi)(yi)長(chang)期保存(cun)。此外(wai)，為了節約檢測(ce)成本，可以(yi)(yi)將不同(tong)時間(jian)收集的樣品放于-20℃或(huo)-80℃冰箱保存(cun)，而(er)后一起檢測(ce)。
2.反(fan)應體系(xi)的配制(zhi)
表1：恒溫反應體系的配(pei)制

（1）將溶(rong)(rong)液(ye)Ⅰ、溶(rong)(rong)液(ye)Ⅲ從-20℃冰(bing)箱中取(qu)出(chu)，室溫放置待其融(rong)化，溶(rong)(rong)液(ye)Ⅱ從-20℃冰(bing)箱中取(qu)出(chu)后置于冰(bing)上(shang)備用。溶(rong)(rong)液(ye)Ⅱ、Ⅲ使用前各需(xu)1000rpm離心30 sec，用(yong)移液(ye)槍吹洗(xi)均勻。三(san)種試(shi)劑按表1比例(li)混合。
【舉例】：①如果(guo)待測樣(yang)品為8個（加上1個陰性和(he)1個陽性對照），則樣(yang)品總數為10個。溶液(ye)Ⅰ的(de)總體(ti)積(ji)為22.5×10×1.06=238.50 μL。溶(rong)液Ⅱ的(de)總體(ti)積(ji)為1×10×1.06=10.60 μL。溶(rong)液Ⅲ的(de)總體(ti)積(ji)為0.5×10×1.06=5.3 μL。將溶(rong)液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ混合均勻即可(ke)。②如果打(da)算一個(ge)試劑盒一次使用完畢，可(ke)以按照以下方法進行(xing)配制：直接往整管溶液Ⅰ（1150 μL）中加入50 μL 溶(rong)液Ⅱ和25 μL溶(rong)液Ⅲ，混合均勻(yun)即可(ke)。如果一(yi)(yi)次使(shi)用完畢，一(yi)(yi)個(ge)試劑盒大(da)概可(ke)以檢測(ce)48-49個(ge)樣品。
【注】：①總(zong)體積中多配制6%（如果(guo)覺得該比(bi)例不合適，可以自己調整(zheng)），是為了防止移液誤差，以保證每個反應管(guan)中的反應液足量。②溶(rong)液Ⅰ和溶(rong)液Ⅲ使用完后(hou)，請繼續放回-20 ℃冰箱中保存。③溶液Ⅱ必須一(yi)直在-20 ℃冰箱中保存（溶液Ⅱ在(zai)-20 ℃不會凍住），不能放(fang)于(yu)室溫。④溶液Ⅱ和溶液Ⅲ開(kai)蓋之前，請離心一下(xia)。
（2）將上(shang)述配制好的反應體(ti)系，吹打均勻后(hou)，按每管(guan)(guan)24 μL分裝(zhuang)到0.2 mL的PCR管(guan)(guan)中(zhong)。盡(jin)量保證每管(guan)(guan)的反應液體(ti)積一(yi)樣。PCR管(guan)(guan)應該(gai)使用透(tou)明(ming)度良好的薄壁PCR管(guan)(guan)。
（3）往(wang)測試管(guan)(Test)中加入1μL待測細胞培養液；往(wang)陽(yang)性(xing)對照管(guan)(Positive)中加入1 μL陽(yang)性(xing)支原(yuan)體DNA；往(wang)陰性(xing)對照管(guan)(Negative)中加入1μL滅(mie)菌水；反應液的(de)總(zong)體積為25 μL。
【注】：①裝有陽性支(zhi)原體DNA的螺(luo)口(kou)管開蓋之前(qian)，用(yong)力甩(shuai)一下，或(huo)者用(yong)迷(mi)你(ni)離心機即可。
②進行反應體系配制的房(fang)間，與進行樣品(pin)前處理(li)、加(jia)陽(yang)性(xing)對照DNA、樣品(pin)DNA的房(fang)間最好分(fen)開。

3. 反(fan)應
PCR儀(yi)設置程序(xu)：61℃，60 min；10℃，forever；熱(re)蓋溫度(du)，105℃。
【注】：若實驗(yan)室反應場所沒有PCR儀，可用水(shui)(shui)浴(yu)鍋(guo)(guo)代替，水(shui)(shui)浴(yu)鍋(guo)(guo)顯示溫(wen)(wen)度與實際溫(wen)(wen)度的(de)溫(wen)(wen)差不超過0.5℃，另須往每個反應管(guan)(guan)內加入(ru)25μL礦物油(you)，以防止水(shui)(shui)份揮發，然(ran)后(hou)蓋上(shang)蓋子，將反應管(guan)(guan)插(cha)入(ru)帶(dai)孔的(de)漂板內，放入(ru)已經升溫(wen)(wen)到61℃的(de)水(shui)(shui)浴(yu)內，準(zhun)確(que)反應60 min。
4. 結(jie)果判斷
61℃反應60 min后(hou)，立刻取出反(fan)應(ying)管，放于室溫。以一張白紙或白色(se)泡沫(mo)盒為背景，通(tong)過(guo)反(fan)應(ying)管溶液顏(yan)色(se)的變化(hua)，即可(ke)判斷(duan)檢測結果。如(ru)果溶液為藍綠色(se)，則(ze)說明有(you)支(zhi)原(yuan)體(ti)污染；如(ru)果為紫紅色(se)，則(ze)說明沒有(you)支(zhi)原(yuan)體(ti)污染(如(ru)圖1)。
【注(zhu)】：如果(guo)反應60 min，陽性對(dui)照效果(guo)不明(ming)顯，可以繼續反應10 min。

               

產品圖片

注意事項

1.該產品(pin)僅限于科學實驗研究使用，不得(de)用于臨床診斷、治療等(deng)領域。
2.必須確保使用的移(yi)液(ye)(ye)槍(qiang)本(ben)身沒有(you)殘留的支(zhi)原(yuan)體，盡量用新(xin)購移(yi)液(ye)(ye)器、新(xin)開(kai)(kai)封的槍(qiang)頭(tou)操(cao)作(zuo)。整個(ge)操(cao)作(zuo)過程，佩(pei)戴kouzhao不要開(kai)(kai)口說話。由于本(ben)試劑盒非常靈敏，移(yi)液(ye)(ye)槍(qiang)如吸附有(you)，或者人為(wei)帶入支(zhi)原(yuan)體均(jun)有(you)可能造(zao)成假陽性。
3.最(zui)好(hao)使用帶(dai)濾(lv)芯的吸(xi)(xi)(xi)頭吸(xi)(xi)(xi)取(qu)溶液和陽(yang)性支原體等。如果沒有帶(dai)濾(lv)芯的吸(xi)(xi)(xi)頭，至少應該使用新開封的吸(xi)(xi)(xi)頭。
4.檢測過程中，用過的(de)各類吸頭、離心管務必小心處理，應裝(zhuang)入含(han)有半(ban)瓶水的(de)帶蓋的(de)、可密(mi)封的(de)垃(la)圾瓶內。反應后的(de)PCR管(guan)，不要開蓋，用過后將其用自封(feng)袋密閉，扔到遠(yuan)離(li)細胞房的獨立垃圾桶內。
5.如果細胞被(bei)支原體污染，可以選購本公司或其他供應商提供的去(qu)(qu)除試劑盡早(zao)去(qu)(qu)除。
6.如待測樣品是低(di)溫(wen)保(bao)存(cun)的(de)血(xue)漿、血(xue)清、臍(qi)帶血(xue)、胰酶、抗(kang)生(sheng)素(su)、未使用的(de)培養(yang)液等，這(zhe)類樣品中支原(yuan)體含量較(jiao)低(di)，為了保(bao)證支原(yuan)體DNA的(de)檢(jian)出率，可通過離心濃縮提高樣品DNA濃度，再(zai)進(jin)行檢(jian)測。

7.如(ru)(ru)果反應(ying)(ying)后(hou)，發現(xian)個別樣(yang)品(pin)的(de)(de)顏色(se)介(jie)于陽性(xing)和陰性(xing)之間（正常(chang)這(zhe)種情況應(ying)(ying)該概(gai)率很低，如(ru)(ru)果經常(chang)出現(xian)，樣(yang)品(pin)中(zhong)可(ke)能含(han)有可(ke)干(gan)擾正常(chang)指示效果的(de)(de)物(wu)質(zhi)，必須先去(qu)除。），可(ke)以將這(zhe)些樣(yang)品(pin)繼續(xu) 61℃反應(ying)(ying) 10  min。10  min后(hou)，如(ru)(ru)果其(qi)顏色(se)仍然與陽性(xing)對照(zhao)的(de)(de)顏色(se)不同，該樣(yang)品(pin)應(ying)(ying)該判為陰性(xing)。這(zhe)種可(ke)疑樣(yang)品(pin)建議用相(xiang)同試劑(ji)盒(he)(he)或者(zhe)不同原(yuan)理的(de)(de)其(qi)他(ta)試劑(ji)盒(he)(he)（如(ru)(ru)本公(gong)司的(de)(de)《PCR 法支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)(he)》貨(huo)號(hao)：AC16L064、《發光法支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)(he)》貨(huo)號(hao)：AC16L062 、《探針(zhen)法支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)(he)》貨(huo)號(hao)：AC16L068）進行復檢(jian)。
8.反應后，請勿打開反應管的蓋子，否則有可能造成檢測環境的污染。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養專用)的優勢

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