Hoechst 33342 *超級純*

產品(pin)描述

Hoechst 33342是一種可以穿(chuan)透細胞膜的藍色熒光染料，對(dui)細胞的毒性較低(di)，在嵌入雙鏈(lian)DNA后釋(shi)放強烈(lie)的藍色熒光。Hoechst 系列染料因與DNA結合的特(te)性，也常被用來(lai)進行(xing)線粒體(ti)DNA的觀察。

Hoechst33258和Hoechst33342是兩種非常相近(jin)的Hoechst染料(liao)，他(ta)們都(dou)在紫外段350 nm被激發(fa)，發(fa)射波長都(dou)為461 nm，兩種(zhong)染料經常被用來替代(dai)另一種(zhong)熒光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有更強(qiang)的(de)親脂性，因此(ci)能更好的(de)透過(guo)完整的(de)細胞膜，在部分實驗(yan)中Hoechst33258的(de)細胞(bao)透過性存在明顯(xian)不足。用(yong)于細胞(bao)核(he)染色時，推薦(jian)的(de)Hoechst 33342工作終濃(nong)度為0.5～5 μM，在一些(xie)敏感性(xing)實驗時，建議設置多個染色濃度，以獲得需要(yao)的染色效果。

訂(ding)購信息

技術參數

　　光(guang)學(xue)性質：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

　　化學參(can)數：分子量：561.93  溶劑：Water        CAS：23491-52-3

保存方法

　　冰袋(dai)（wet ice）運輸(shu)，-20℃干燥避光保存，保質期12個月(yue)。

使用方法

1. 緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖(chong)液制備10～50 μM Hoechst 33342染色液。李記生(sheng)物也提(ti)供配(pei)制(zhi)好的20 mM Hoechst 33342（CAT:AC12L021）產品，既(ji)方(fang)便存放，以方(fang)便稀(xi)釋備用。

2. 固定(ding)的(de)細胞或(huo)組(zu)織(zhi)染(ran)色。對于固定(ding)的(de)細胞或(huo)組(zu)織(zhi)樣品(pin)，固定(ding)后，適(shi)當洗滌去除固定(ding)劑。依(yi)次按步驟進行免疫熒光(guang)染(ran)色，和(he)Hoechst33342染色。如果不進行(xing)(xing)免(mian)疫熒(ying)光染色，則直接按步(bu)驟進行(xing)(xing)Hoechst33342染色。

（1）對于貼壁細(xi)胞(bao)或組織切(qie)片：加(jia)入適(shi)量Hoechst 33342染(ran)色液(ye)，覆(fu)蓋住樣(yang)(yang)品(pin)(pin)即可。對于懸浮細胞：至少(shao)加(jia)入待測染(ran)色樣(yang)(yang)品(pin)(pin)體積3倍的染色液，混(hun)勻。室溫放置3~5 min。

（2）吸除(chu)Hoechst 33342染色液，用(yong)TBST、PBS或生理(li)鹽(yan)水洗(xi)滌(di)2~3次(ci)，每次(ci)3~5 min。

（3）直接在熒光顯微鏡下觀察(cha)或封片后熒光顯微鏡下觀察(cha)。激發(fa)波長350 nm，發射波長461 nm。

3. 活細胞或組織染色

（1）細胞培養物中(zhong)加入適量Hoechst 33342染色液，約1/10細(xi)胞培養基體積，必須充分覆蓋住(zhu)待染(ran)色的樣品(pin)。通常對于六(liu)孔板一個孔需(xu)加入1 mL染色液，對于96孔板一個孔需(xu)加(jia)入(ru)100 μL染色液。

（2）在37℃培養細胞10～20 min。

（3）用PBS或(huo)合適(shi)的緩沖液洗細胞兩(liang)次。

（4）直接在(zai)熒光(guang)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)或封(feng)片后熒光(guang)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)。激發波長(chang)350 nm，發射波長461 nm。

注意事(shi)項

1. Hoechst 33342溶于水，溶解(jie)度可達20mM(約10mg/ml)。您也可直接購買20 mM的(de)液體規格產品(pin)（貨(huo)號:AC12L021）。

2. Hoechst 33342對人體有一定刺(ci)激性，請注(zhu)意適當防護。

3. 熒光(guang)染料都存(cun)在淬滅的(de)問題，建議染色后盡(jin)量當天完成檢測(ce)。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗(kang)熒光淬滅封片液。