CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

產品描述

CFDA-SE分子式為C₂₉H₁₉NO₁₁，分(fen)子量(liang)為(wei)557.47，CAS號為(wei)150347-59-4，CFDA SE英文名是(shi)Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，CFDA-SE可(ke)(ke)用(yong)于(yu)細(xi)胞(bao)示蹤，也(ye)可(ke)(ke)用(yong)于(yu)細(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)檢測。CFDA SE可(ke)(ke)以通(tong)過(guo)完好的細(xi)胞(bao)膜，進入(ru)(ru)細(xi)胞(bao)后被細(xi)胞(bao)內的酯酶(mei)(esterase)催化(hua)分(fen)解成CFSE，CFSE可(ke)(ke)以隨機地(spontaneously)、不可(ke)(ke)逆地和(he)細(xi)胞(bao)內蛋白的賴氨(an)酸殘基（Lysine）或其(qi)它(ta)氨(an)基發生結合反應，并標(biao)(biao)記這些蛋白。在加(jia)入(ru)(ru)熒(ying)(ying)光探針CFDA SE后大約24小時，即可(ke)(ke)充分(fen)標(biao)(biao)記細(xi)胞(bao)。被CFDA SE標(biao)(biao)記的非(fei)分(fen)裂細(xi)胞(bao)的熒(ying)(ying)光非(fei)常(chang)穩定，標(biao)(biao)記時間(jian)可(ke)(ke)達(da)數個月。

CFDA, SE標記細胞(bao)呈(cheng)綠(lv)色熒光(guang)，檢(jian)測(ce)時的激(ji)發波長(chang)可(ke)以(yi)選擇488nm激(ji)發，發射波長(chang)為518nm，使(shi)用流(liu)式細胞(bao)儀檢(jian)測(ce)時可(ke)以(yi)采用FL1 檢(jian)測(ce)通道。除了流(liu)式細胞(bao)儀檢(jian)測(ce)細胞(bao)增殖外(wai)，還可(ke)用熒光(guang)酶標板定量活細胞(bao)數目，或者用熒光(guang)顯微鏡進行(xing)均一染色的細胞(bao)示蹤(zong)觀察。

CFDA-SE標記(ji)的(de)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)每分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)一(yi)(yi)次(ci)，子代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)熒(ying)光(guang)會減(jian)(jian)弱一(yi)(yi)半，這樣通(tong)過流式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)就可以(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)出沒有分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)一(yi)(yi)次(ci)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)熒(ying)光(guang)強(qiang)度減(jian)(jian)半(1/2)，分(fen)(fen)(fen)離兩次(ci)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)熒(ying)光(guang)強(qiang)度再減(jian)(jian)半(1/4)，以(yi)此類推，熒(ying)光(guang)強(qiang)度按照1/2，1/4，1/8，1/16的(de)規律逐(zhu)漸遞減(jian)(jian)。采用(yong)CFDA SE通(tong)過流式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)獲得的(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結(jie)果(guo)每一(yi)(yi)個峰(feng)代表一(yi)(yi)種分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)次(ci)數(shu)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，從右至(zhi)左的(de)峰(feng)通(tong)常依次(ci)為分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)0次(ci)、1次(ci)、2次(ci)、3次(ci)等次(ci)數(shu)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)次(ci)數(shu)較多(duo)(duo)后，分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)0次(ci)或1次(ci)等沒有分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)或分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)次(ci)數(shu)較少(shao)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)會逐(zhu)漸減(jian)(jian)少(shao)直至(zhi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)不(bu)到(dao)。CFSA，SE可檢(jian)(jian)測(ce)(ce)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)次(ci)數(shu)多(duo)(duo)達八次(ci)甚至(zhi)更多(duo)(duo)。經CFDA, SE標記(ji)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)可用(yong)于(yu)體外和體內(nei)增殖研究，且具有不(bu)會使鄰近細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)染色的(de)功能(neng)。CFDA, SE常用(yong)于(yu)淋巴細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)增殖檢(jian)(jian)測(ce)(ce)，也(ye)可用(yong)于(yu)成纖維(wei)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，自然殺傷細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，造(zao)血祖細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等其(qi)他細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)增殖檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。CFDA SE如果(guo)和其(qi)它熒(ying)光(guang)探針(zhen)聯用(yong)，可以(yi)獲取不(bu)同分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)(lie)次(ci)數(shu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)其(qi)它相(xiang)關信(xin)息(xi)。我們的(de)CFDA SE探針(zhen)產品以(yi)25mg粉末包裝的(de)形(xing)式提供。

運輸與保存方法

常溫運輸，-20℃干燥(zao)避光保(bao)存，保(bao)質期24個月。避免(mian)反復多次凍融。

使用方(fang)法

1.保存(cun)液(ye)配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解(jie)(jie)1mg CFSE，超音波溶解(jie)(jie)，得到5mM CFSE保存(cun)液；將其按40μL體積分裝(zhuang)于避光的(de)無菌凍(dong)存(cun)管中，-20℃可保存(cun)2個月。

注(zhu)意：CFSE遇水容易分解，所以在配置(zhi)(zhi)時(shi)候要用(yong)無水DMSO，配置(zhi)(zhi)后計算用(yong)量(liang)(liang)盡(jin)快使用(yong)，多余(yu)的立(li)刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑，對于蛋(dan)白質會有損(sun)傷，所以在配置(zhi)(zhi)的時(shi)候DMSO用(yong)量(liang)(liang)越(yue)少(shao)越(yue)好；

2. 工作液配制

取(qu)5mM的CFSE稀釋液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重(zhong)懸細胞。用有5％FCS的PBS重(zhong)懸細胞，細胞濃(nong)度一般為1x1x10⁶/ml （體外實驗）或1x1x10⁷/ml（轉(zhuan)染(ran)實(shi)驗）。

b.染色。1ml DFSE工作液(ye)(ye)與1ml細胞懸液(ye)(ye)混合(he)后(hou)37℃孵育5－10分鐘。期間輕輕混勻兩(liang)次（用(yong)手輕彈管(guan)壁，切忌吹(chui)打）。

c.終止染色。用*培養液洗(xi)(xi)滌(di)3次并離(li)心。一般在(zai)第2次洗(xi)(xi)滌(di)后再孵育5分鐘后進行第3次洗(xi)(xi)滌(di)。冰(bing)冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入(ru)1ml混勻 ，然后續加入(ru)7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈，切忌吹(chui)打）,1 500 r/ min 離(li)心5 min。

d.流(liu)式細胞儀在FL1通(tong)道(dao)檢測。